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核酸提取仪的两种印证方法

作者: 发布时间:2017-12-14 浏览次数:2183
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       随着近年来分子生物学技术的高速发展,核酸扩增、杂交、测序在分子诊断各领域中的作用日益凸显,而上述技术首先面临的问题就是如何从复杂的样本中快速有效的提取核酸,随着科学的不断进步,市场的不断壮大,传统的酚氯仿、离心柱方法逐渐不能满足客户的需求,磁珠法核酸提取技术应运而生,解决了传统方法不能实现的自动化、高通量等问题。而磁珠法自动化核酸提取技术包含三个重要组成:1、磁珠,2、试剂,3、自动核酸提取仪,本文着重阐述如何验证核酸提取仪与核酸提取磁珠的兼容性或匹配程度。

一、磁性验证

       磁棒是核酸提取仪的核心部件,饱和磁化强度是核酸提取磁珠的重要性能参数,两者相互匹配才能使自动化核酸提取过程高效运转。为此可以设置空白实验来验证特定磁珠与核酸提取仪的匹配程度。

  实验流程:以吉恩特02系列磁珠、GNT-Mini16核酸提取仪为例

1、核酸提取磁珠摇匀后向1孔位加入500微升磁珠悬液,

2、2***6孔位加入500微升超纯水

3、具体参数设置见图片

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4、实验运行完毕之后将第6孔的核酸提取磁珠磁珠悬液完全吸出转移到已称重的EP管中,在磁力架上吸弃上清,EP管开盖烘干***恒重,与实际加入磁珠量对照,得出核酸提取仪与该磁珠在转移磁珠能力上的匹配程度。

  实验结果:吉恩特02系列磁珠、GNT-Mini16磁珠回收率在99%以上。

二、孔间差异

       孔间差异是衡量核酸提取仪稳定性的重要参数,仪器孔位间的提取效率是由多重因素影响,加热部件、震动部件,工作台面的平整度等等,***终反应到数据上面造成各孔位之间提取效率的差异。为了排除其他因素(试剂、样品)的干扰,尽量只考察核酸提取仪的性能,选用核酸纯化试剂盒与已知样品浓度的DNA来验证。

  实验流程:

1、5孔位加入GNT-00205核酸提取磁珠 5微升和超纯水 200微升,

2、1孔位加入50微升DNA溶液与100微升结合液, 

3、2孔位加入400微升洗涤液,

4、6孔位加入50微升洗脱液

5、具体实验流程见下图

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实验结果:

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结论:

       GNT-00205核酸提取磁珠与GNT-Mini16在DNA纯化实验中的孔间方差为0。0263,孔间差异较小。

       上述两个实验完成之后,可以进行其他样本的实验,进一步检验核酸提取磁珠与仪器在复杂环境下稳定性,如全血样本、植物样本、动物组织样本等等,实验中应注意采用同一样本,或者将多个单个样本前处理以后混匀成为一个样本,以此来检验仪器的稳定性以及磁珠在此复杂环境下与整体试剂、样本的契合程度。

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