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全自动核酸提取仪的常见问题分析

作者: 发布时间:2017-12-14 浏览次数:1014
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       随着磁珠法核酸提取技术的日益普及,基于磁珠法核酸提取开发的全自动核酸提取仪,因其高通量、自动化、减少操作者与试剂及样本的接触、减少人工操作引起的误差,结果稳定,重复性好等特点使得全自动核酸提取仪越来越被市场所接受。目前市场上基于磁珠法的核酸提取仪大致可分为两类:移液式和磁棒式。

       本文重点介绍磁棒式全自动核酸提取仪在实际操作中的问题,及相应的解决方案。

       1、手工提取与上机提取的结果存在显著差异

       磁棒式全自动核酸提取仪通常采用磁保护套(搅拌套)来转移磁珠和混匀液体,深孔板底部采用加热模块加热深孔板孔内的液体,从而模拟手工操作的流程。手工提取的实验结果只能说明手工操作流程及试剂质量没有问题,转移到仪器上后,要综合考虑。

       磁珠法核酸提取通用的操作流程:裂解、结合、洗涤、洗脱,在手工操作时都可以分步骤实现,而在上机操作时考虑到***大限度避免人工操作,通常会把裂解与结合放在一个孔位内进行,客户一般会采用醇类作为结合液,这样操作不但稀释了裂解液,还影响裂解效率,而且由于孔位内液体温度不断升高,导致醇类挥发,也影响结合效率。此外,全自动核酸提取仪一般采用底部加热模式,孔位内的温度不能以仪器设置温度为标准,不同厂家的仪器之间加热效率也会有所不同,所以单说裂解这一步,就需要对上机的体系进行更多的优化。

       2、仪器孔位之间提取效率有所差异

       磁棒式全自动核酸提取仪通常采用卡片或弹簧钢珠固定96孔深孔板,并且大部分仪器,底部都会有凹形槽的加热条,在进行加热时,如果深孔板的孔位与底部加热凹槽贴合的不紧密,会直接影响实验结果,这种情况导致孔位间的实验结果不稳定是随机出现的。如果发现某一固定孔位的提取结果总是与其他孔位相差比较大,可以考虑仪器加热模块是否有问题,同时观察该孔位的上游裂解孔位内是否有磁珠残留,可用空白样本检测仪器在孔位间的转移磁珠能力是否彻底。

       3、上机提取时加入的洗脱液体积与实际得到的核酸溶液体积存在显著差异

       目前市场大多数的磁棒式全自动核酸提取仪的加热模块位于96孔深孔板的***、六、七、十二列,***、第七列绝大多数作为裂解结合孔位使用,而第六、第十二列作为洗脱孔位使用,由于大多数的提取实验在裂解结合步骤需要加热、而第六列与第七列相邻,由于热传导效应的存在,使得裂解加热时同样也会导致位于第六列内的洗脱液温度升高,从而导致洗脱液蒸发,由于洗脱液的体积较小(50ul-200ul),使得实际得到的核酸溶液体积相比于加入的洗脱液体系有较大差异。

       综上,在实际操作中,手工方案一般无法照搬***机方案中,需要根据仪器、耗材、试剂的配合情况进行细节上的优化,为了提高效率,建议广大用户使用成熟的核酸自动化提取方案,吉恩特生物现有各类常见生物材料的自动化DNA提取成熟方案,提取效率高,稳定性好,欢迎各位老师咨询与讨论。

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